## [Polymerase-Kettenreaktion](/de/node/58444) Definition Eine in vitro enzymatische Methode, die ein spezifiziertes DNA-Fragment durch iterative Zyklen von Denaturierung, Primer-Annealing und Extension mithilfe einer hitzestabilen DNA-Polymerase und sequenzspezifischer Primer exponentiell vervielfältigt. ## Prinzip Prinzip Gezielte exponentielle Amplifikation wird durch wiederholtes thermisches Zyklisieren erreicht, das Matrizenstränge trennt, Primern Bindung erlaubt und die Polymerase die Primer verlängert; Spezifität wird durch Primersequenz und Reaktionsbedingungen bestimmt. ## Demonstration Demonstration Amplifikation eines diagnostischen bakteriellen Gens aus einem klinischen Abstrich: Primer, die ein 200 bp-Lokus umschließen, werden in 30 thermischen Zyklen verwendet, um Millionen Kopien zu erzeugen, die durch Gel-Elektrophorese oder Fluoreszenz nachweisbar sind. ## Fehlanwendung Fehlanwendung Ein positives Ergebnis als Beweis für lebensfähige Organismen oder quantitative Häufigkeit deuten ohne Kontrollen; Kontamination nicht kontrollieren, unspezifische Primer verwenden oder Fehlpriming zulassen, was zu falsch-positiven oder artefaktischen Banden führt. ## Konsequenz Konsequenz Ermöglicht die empfindliche Nachweisführung spezifischer DNA-Sequenzen aus geringen Probenmengen, Routinen für Klonierung, Genotypisierung und viele nachgelagerte molekulare Arbeitsabläufe, sofern Kontrollen und Validierung eingesetzt werden. ## Umkehrung Umkehrung Ohne Primerspezifität oder thermisches Zyklisieren (z. B. zufällige Amplifikation oder isotherme nicht-spezifische Polymerase-Reaktionen) versagt die zielgerichtete exponentielle Amplifikation und die Ergebnisse sind nichtselektiv oder von geringer Treue. ## Abgrenzung Abgrenzung Gilt für die Amplifikation von DNA-Zielen in vitro unter Verwendung sequenzgeführter Primer und einer Polymerase, die thermisches Zyklisieren toleriert; schließt isotherme Amplifikationsmethoden, direkte RNA-Detektion ohne Reverse Transkription und nicht-enzymatische Nukleinsäuretests aus. ## Semantische Spannung Semantische Spannung Spannung zwischen der Auffassung von PCR als quantitativer Messung versus einem qualitativen Amplifikationsassay; Überschneidung mit isothermen Amplifikationsmethoden, die ähnliche Zwecke erfüllen, sich aber mechanistisch unterscheiden. ## Synthese Synthese PCR ist ein Verfahren zur Erzeugung großer Kopienzahlen einer definierten DNA-Sequenz durch Primer-gesteuerte enzymatische Verlängerung über iterative thermische Zyklen und ermöglicht so Detektion und Manipulation von Nukleinsäuren.