## [Cytométrie en Flux](/fr/node/58458) Définition Une méthode basée sur un laser qui analyse les propriétés physiques (diffusion avant et latérale) et fluorescentes de cellules ou particules individuelles en suspension lorsqu'elles passent au foyer d'interrogation, et qui peut trier des sous-populations en déviant des gouttelettes chargées (FACS). ## Principe Principe Le focalisation hydrodynamique aligne les particules une à une dans les faisceaux laser ; des détecteurs mesurent la diffusion et la fluorescence de marqueurs marqués ; des signaux numériques sont mis en porte (gating) pour définir des populations, et le tri assigne une charge puis dévie électrostatiquement les gouttelettes pour collecter des sous-ensembles. ## Démonstration Démonstration Marquage de cellules mononucléées du sang périphérique avec anticorps conjugués à des fluorophores anti‑CD3, CD4 et CD8, sélection des lymphocytes par diffusion, quantification des fréquences CD4+ et CD8+, puis isolement des CD4+ par FACS pour culture ultérieure. ## Mauvaise application Mauvaise application Ne pas compenser le recouvrement spectral entraînant des faux positifs, utiliser des stratégies de gating inappropriées sans témoins, surinterpréter des événements très rares sans acquisition suffisante ou enrichissement, et analyser des cellules mortes/ de mauvaise qualité sans exclure la viabilité. ## Conséquence Conséquence Fournit un phénotypage à haut débit et multiparamétrique et un comptage cellulaire, et—lorsque le tri est utilisé—permet d'isoler des sous-populations vivantes pour des essais fonctionnels ou un profilage moléculaire ultérieur. ## Inversion Inversion La microscopie conserve le contexte spatial et morphologique et peut montrer la localisation subcellulaire, mais elle a un débit inférieur et est moins quantitative pour de grands nombres de cellules. ## Limite Limite Nécessite une suspension de cellules uniques et des différences détectables par fluorochrome ou diffusion; exclut le contexte tissulaire adhérent sauf si dissocié; limitée par la disponibilité des fluorochromes, la sensibilité des détecteurs, le chevauchement spectral et la viabilité de l'échantillon. ## Tension sémantique Tension sémantique Tension entre cytométrie analytique (mesure seule) et FACS (capacité de tri), et entre panels à nombreux paramètres qui augmentent l'information et la complexité de la compensation et de l'analyse des données. ## Synthèse Synthèse La cytométrie en flux est une technique sur suspension unicellulaire utilisant diffusion lumineuse et fluorescence pour phénotyper et quantifier rapidement les cellules et, si équipée pour le tri, isoler physiquement des populations définies ; elle sacrifie la structure tissulaire au profit de la vitesse et de la multiplexation, et exige une conception de panel et des contrôles rigoureux.