Un ensayo genético que detecta interacciones proteína–proteína binarias expresando dos proteínas de fusión en levadura: una fusionada a un dominio de unión al ADN (cebo) y la otra a un dominio de activación transcripcional (presa); la interacción física reconstituye un factor de transcripción funcional que activa un gen reportero.

Principio

La interacción física entre cebo y presa aproxima los dominios de unión y activación sobre un promotor, restaurando la expresión del reportero; la selección o la lectura del reportero sirve como indicador genético de interacción en el núcleo de la levadura.

Demostración

Escenario ilustrativo: expresar la proteína A fusionada al dominio de unión GAL4 y la proteína B al dominio de activación GAL4 en levadura; la interacción permite crecer en medio selectivo o activar un reportero colorimétrico/fluorescente, indicando una interacción candidata para seguimiento.

Aplicación incorrecta

Falsos positivos por autoactivación del cebo, falsos negativos por fusiones mal plegadas o mal expresadas, o extrapolar interacciones detectadas en el núcleo de levadura a todos los contextos celulares sin corroboración son patrones frecuentes de mal uso.

Consecuencia

Cuando se controla adecuadamente, los cribados Y2H permiten identificar interacciones binarias candidatas y construir redes de interacción que informan hipótesis sobre función proteica y ensamblaje de complejos.

Inversión

La inversión serían ensayos que detectan interacciones en compartimentos celulares nativos o mediante co-purificación bioquímica (co-IP, pull-down) en lugar de reconstitución transcripcional; split-ubiquitina o variantes de Y2H para membranas adaptan la lógica a proteínas de membrana.

Límite

Detecta interacciones que pueden ocurrir en el núcleo de levadura y toleran la fusión con dominios; puede perder interacciones que requieren modificaciones postraduccionales específicas, cofactors ausentes en levadura o contextos de membrana sin sistemas adaptados.

Tensión semántica

Tensión entre Y2H y ensayos bioquímicos/in vivo (co-IP, FRET, BiFC) porque Y2H reporta un potencial de interacción binaria en levadura más que confirmar dinámica, estequiometría o relevancia fisiológica en el entorno nativo de la proteína.

Síntesis

Y2H convierte una asociación proteína–proteína física en una señal reportera genética mediante la reconstitución de un factor de transcripción modular; es una herramienta poderosa de descubrimiento cuando se combina con validaciones ortogonales para distinguir verdaderos interactores binarios de artefactos de expresión o contexto nuclear.