Définition
Technique chromatographique en phase liquide qui utilise une pression élevée pour faire circuler une phase mobile à travers une colonne densément remplie d'une phase stationnaire, permettant une séparation à haute résolution des composants d'un mélange pour des analyses qualitatives et quantitatives.
Principe
Principe
La séparation résulte d'interactions différentielles (partage, adsorption, échange d'ions ou exclusion de taille) entre les analytes et la phase stationnaire, combinées à la composition contrôlée de la phase mobile et à une pression d'écoulement élevée pour réduire l'élargissement des bandes et augmenter la vitesse et la résolution.
Démonstration
Démonstration
Séparation analytique d'un mélange pharmaceutique sur une colonne silice greffée C18 en utilisant un gradient eau–acétonitrile à 300 bars, donnant des pics séparés pour le principe actif et les impuretés et des temps de rétention reproductibles pour la quantification.
Mauvaise application
Mauvaise application
Choisir la HPLC pour de petites molécules très volatiles mieux adaptées à la chromatographie en phase gazeuse, ou surcharger la colonne et utiliser un pH ou une polarité de phase mobile inadaptés provoquant un traînage des pics et une coélution, conduisant à une quantification erronée.
Conséquence
Conséquence
Bien appliquée, la HPLC fournit une haute résolution, des temps de rétention et une forme de pic reproductibles, une quantification précise avec étalonnage approprié, et une évolutivité de l'analytique à la préparation ; elle permet aussi l'association à des détecteurs (UV, SM) pour l'identification des composés.
Inversion
Inversion
La chromatographie sur colonne en gravité ou sur papier à basse pression, où la séparation repose sur des phases stationnaires grossières, un transfert de masse lent et une résolution plus faible, sans contrôle haute pression.
Limite
Limite
Couvre les méthodes en phase liquide avec colonnes remplies et phase mobile pompée ; n'inclut pas la chromatographie en phase gazeuse, les méthodes planaires comme la CCM, ni les séparations fondées uniquement sur la mobilité électrophorétique. Nécessite la compatibilité des analytes avec des solvants liquides et la tolérance aux pressions utilisées ; peu adapté aux analytes extrêmement volatils ou gazeux.
Tension sémantique
Tension sémantique
L'expression 'chromatographie liquide' peut désigner toute séparation en phase liquide, tandis que 'HPLC' implique spécifiquement des colonnes remplies à haute pression et des particules fines — tension quand on appelle HPLC des configurations à basse pression.
Synthèse
Synthèse
La chromatographie liquide à haute performance est l'implémentation sous haute pression et à colonnes remplies de la chromatographie en phase liquide, exploitant la composition contrôlée de la phase mobile et des phases stationnaires finement divisées pour obtenir des séparations rapides et à haute résolution adaptées à l'analyse chimique précise et quantitative.