Une technique de détection des protéines qui sépare les protéines par électrophorèse (généralement SDS-PAGE), les transfère sur une membrane et les révèle à l'aide d'anticorps primaires et secondaires pour visualiser des protéines spécifiques ou des modifications post‑traductionnelles.

Principe

Séparation électrophorétique selon la taille (et éventuellement la charge), immobilisation sur membrane, liaison sélective de l'anticorps à l'épitope cible et production de signal par réactifs secondaires enzymatiques ou fluorescents ; l'intensité du signal reflète l'abondance relative dans la plage linéaire de détection.

Démonstration

Comparer le niveau de phosphorylation d'une kinase de signalisation dans des lysats de cellules traitées versus non traitées en utilisant un anticorps phospho‑spécifique et en normalisant sur un témoin de chargement.

Mauvaise application

Interpréter l'intensité d'une bande comme une quantité absolue sans établir la plage linéaire de détection et sans témoins de chargement/ transfert appropriés ; utiliser des anticorps non validés provoquant des bandes hors‑cible ou un bruit de fond.

Conséquence

Fournit une preuve résolue par poids moléculaire de la présence d'une protéine, de ses isoformes et de ses modifications, et peut être semi‑quantitatif si des standards, des réplicats et une normalisation appropriée sont employés.

Inversion

La spectrométrie de masse protéomique offre une identification protéique plus large, souvent plus quantitative et non biaisée, tandis que le Western blot cible une ou quelques protéines en dépendant des anticorps.

Limite

S'applique aux flux de travail d'immunodétection après séparation par gel et transfert sur membrane ; exclut les immunoessais non électrophorétiques ; limité par la spécificité des anticorps, l'efficacité du transfert, la plage dynamique et le débit.

Tension sémantique

Tension entre l'utilisation du Western blot comme contrôle qualitatif de présence/poids moléculaire et comme mesure quantitative ; parfois confondu avec d'autres types de blot (dot blot, slot blot) qui ne donnent pas d'information sur la taille.

Synthèse

Le Western blot est une méthode immunologique résolue par gel pour détecter des protéines spécifiques et leurs modifications ; elle apporte un contexte de masse moléculaire et des comparaisons semi‑quantitatives si contrôles et validations sont respectés, mais reste limitée par la performance des anticorps et la linéarité de détection.